U.D. 5.1 UTILIZZAZIONE DELL’AMIDO

OBIETTIVO:
Verificare la capacità dei microrganismi di utilizzare l’amido quale fonte di glucosio per il proprio metabolismo
PRINCIPIO:
La capacità dei batteri di idrolizzare l’amido, trasformandolo in destrine, maltosio e glucosio, dipende da una proprietà genetica dei batteri stessi: quella di produrre l’enzima amilasi
Utilizzando un terreno di coltura in cui è presente amido, è possibile rilevarne la presenza, dopo semina e incubazione, con il reattivo di Lugol, che si colora in blu. Non danno invece colorazione blu i prodotti di idrolisi dell’amido.
L’aggiunta del Lugol sulla coltura determinerà una colorazione blu se il batterio in esame non possiede l’amilasi, giallo-bruna o rossa se il batterio è amilasi +

MATERIALI E STRUMENTI:
MATERIALI BIOLOGICI
Colture microbiche di Escherichia coli e Bacillus subtilis
MATERIALI CHIMICI
Liquido di Lugol
TERRENI DI COLTURA
Starch agar (Nutrient agar, Amido solubile)
VETRERIA, ...
Beuta, treppiede, piastre sterili monouso, ansa, provette, portaprovette
STRUMENTI
Bilancia tecnica, autoclave, termostato, bunsen
  Liquido di Lugol
  (soluzione iodo-iodurata) composto da 1 g di Iodio, 2 g di ioduro di potassio e 200 ml di acqua. La soluzione deve essere fresca perché con il tempo si decolora e acidifica per alterazione dello iodio.

METODICA

(I FASE)

 

 

 Preparare il terreno: soluzione al 10% di amido solubile in
Nutrient agar fuso in ragione di 20ml di soluzione per 100ml
di Nutrient agar.

 

 

 Distribuire in 2 provettoni con tappo metallico
(18-20 ml per provettone).

Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15’.

 

(II FASE)

 

 

 Piastrare in ambiente sterile.

 

 

 Seminare solo metà di 2 piastre, una piastra con Escherichia coli e l’altra piastra con Bacillus subtilis.

 

 

 Incubare a 37° per 48 h.

(III FASE)

 

 

 Aggiungere una goccia di Lugol sulla metà piastra
seminata e una goccia sulla metà non seminata.

 

 

 Una colorazione chiara denota che l’amido è stato
idrolizzato, mentre la colorazione blu-azzurro rivela
ancora presenza di amido.