U.D. 5.2 UTILIZZAZIONE DI CARBOIDRATI DIVERSI

OBIETTIVO:
Saggiare la capacità dei microrganismi di utilizzare carboidrati diversi (Glucosio, Lattosio, Saccarosio) a scopi fermentativi.
PRINCIPIO:
I microrganismi metabolizzano diversi carboidrati attraverso processi fermentativi che portano alla produzione di acidi e/o gas.
La produzione di acidi si può rilevare utilizzando un terreno come il Phenol red broth base che contiene un indicatore di pH, il rosso fenolo, che è rosso in ambiente alcalino, arancio in ambiente neutro e giallo in ambiente acido.
La produzione di gas può essere rilevata con le campanelle di Durhan.

MATERIALI E STRUMENTI:
MATERIALI BIOLOGICI
Colture microbiche di Escherichia coli e Alcaligenes faecalis
MATERIALI CHIMICI
Soluzioni al 10% di glucosio, lattosio, saccarosio
TERRENI DI COLTURA
Phenol red broth base
VETRERIA, ...
Bunsen, beuta, treppiede, ansa, provettoni, portaprovettoni, palloncini tarati, siringhe e filtri sterili, campanelle di Durham
STRUMENTI
Bilancia tecnica, autoclave, termostato, bunsen

 

METODICA

(I fase)

 

 

 Preparare il terreno.

 

 
Distribuire in provette con tappo a vite (10 ml per provetta;
3 provette per ogni microrganismo in esame più una provetta
di controllo che non verrà inoculata).

 

 
Mettere in ogni provetta una campanella di Durhan.

 

 

 Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15’.

 

(II FASE)

 

 
Aggiungere ad ogni provetta 1ml di soluzione di carboidrato,
utilizzando una siringa munita di filtro sterile (3 provette
per i 3 carboidrati diversi per ogni microrganismo in esame).

 

 
Con l’ansa, inoculare con lo stesso ceppo microbico le 3 provette
con i 3 carboidrati diversi. Ripetere per ogni batterio in esame.

 

 

 Incubare a 37°. Dopo 4h fare la prima lettura;
la seconda dopo 24h.

 

(III FASE)

Osservare il colore del terreno e la presenza di gas all’interno delle campanelle
(dopo 4 e 24 ore) e riportare i risultati nella seguente tabella:
microrganismo
glucosio
saccarosio
lattosio
gas
pH
gas
pH
gas
pH
E. coli - - - - - -
A. faecalis - - - - - -

Caratteristiche colturali dei due batteri
microrganismo
glucosio
saccarosio
lattosio
gas
pH
gas
pH
gas
pH
E. coli
+
+
-
-
+
+
A. faecalis
-
-
-
-
-
-