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U.D. 5.3 OSSIDAZIONE E FERMENTAZIONE

OBIETTIVO:
Saggiare la capacità dei microrganismi di metabolizzare i diversi carboidrati (Glucosio, Lattosio, Saccarosio) mediante due processi: la fermentazione e l’ossidazione aerobia.

PRINCIPIO:
I processi per metabolizzare i carboidrati sono due: la fermentazione, che avviene in condizioni di anaerobiosi, e l’ossidazione aerobia.
I microrganismi che fermentano, producono una reazione acida (colorazione gialla) in entrambe le condizioni, quelli che ossidano producono una reazione acida solo in condizione di aerobiosi. I microrganismi non fermentanti e non ossidanti danno reazione alcalina (colorazione blu) in aerobiosi e nessuna modificazione di pH in anaerobiosi.
Il terreno contiene blu di bromotimolo come indicatore di pH; con la degradazione del carboidrato si ha una variazione del pH verso l’acidità e il conseguente viraggio del terreno da verde a giallo.

MATERIALI E STRUMENTI:
MATERIALI BIOLOGICI
Colture microbiche di Escherichia coli e Alcaligenes faecalis
MATERIALI CHIMICI
Soluzioni al 10% di glucosio, lattosio, saccarosio
olio di vasellina o paraffina
TERRENI DI COLTURA
O/F agar
VETRERIA, ...
Bunsen, beuta, treppiede, ago per infissione, provette, portaprovette, palloncini tarati, siringhe e filtri sterili
STRUMENTI
Bilancia tecnica, autoclave, termostato, bunsen

METODICA

(I fase)

Preparare il terreno.

Distribuire in provette con tappo a vite (5 ml per provetta;
6 provette per ogni microrganismo in esame:2 per il glucosio,
2 per il saccarosio e 2 per il lattosio).

Preparare una beuta con della paraffina o dell’olio di vasellina.

Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15’ sia il terreno che la paraffina.

(II FASE)

Aggiungere ad ogni provetta 0,5ml di soluzione di carboidrato,
utilizzando una siringa munita di filtro sterile (2 provette per i 3 carboidrati diversi per ogni microrganismo in esame).

Seminare per infissione con lo stesso ceppo microbico le 2 provette con i 3 carboidrati diversi. Ripetere per ogni batterio in esame.

Coprire il terreno (una sola provetta per ogni zucchero)
con 2 ml di paraffina liquida, infine tappare.

Incubare a 32°-35° per 48h esaminando le provette ogni giorno.

(III FASE)

Osservare la colorazione in ciascuna coppia di provette e riportare i dati in tabella.

microrganismo	glucosio		saccarosio		lattosio
microrganismo	aperta	chiusa	aperta	chiusa	aperta	chiusa
E. coli	-	-	-	-	-	-
A. faecalis	-	-	-	-	-	-

Caratteristiche colturali dei due batteri

microrganismo	glucosio		saccarosio		lattosio
microrganismo	aperta	chiusa	aperta	chiusa	aperta	chiusa
E. coli	AG	AG	-	-	AG	AG
A. faecalis	-	-	-	-	-	-

A = reazione acida
AG = reazione acida e produzione di gas
- = nessuna reazione o reazione alcalina

La produzione di gas si evidenzia con il distacco dal terreno e lo spostamento verso l’alto della paraffina.